肾移植早期排斥反应检测的最新研究《nature medicine》

早期监测排斥反应，尤其是亚临床排斥反应，是影响肾移植长期存活的最主要因素。而传统的监测手段，如血清肌酐（Serum Creatinine）、估算肾小球滤过率（eGFR）和蛋白尿等，虽在临床上应用广泛，但在监测早期排斥反应或亚临床排斥时存在明显的局限性。一旦排斥反应无法得到及时诊断和干预，可能会导致移植物功能的逐步丧失，最终造成移植失败。

活检是目前检测亚临床排斥反应的主要方法，但由于穿刺活检带有侵入性，并考虑到患者禁忌症及依从度，因而临床很难做到怀疑即穿刺。近年来，供体来源的游离DNA（Donor-derived Cell-free DNA，dd-cfDNA）作为一种新兴的非侵入性生物标志物，在肾移植排斥反应检测中显示出巨大潜力。

dd-cfDNA检测方法主要分为基于定量PCR技术平台的“供体基因分型依赖”检测和基于NGS技术平台的“供体基因分型非依赖”检测两种。“供体基因分型非依赖”检测通过直接在受体的总cfDNA检测数据中鉴别供体基因型的信号大小，并计算后者所占百分比；而“供体基因分型依赖“技术，则需通过先分析受体白细胞基因型，在白细胞基因型上为纯和的SNP位点中计算异源小信号的占比，对ddcfDNA进行间接定量，因此基于不同方法所得结果会存在偏差。因无需事先对受者进行基因分型，目前全球临床试验中多采用NGS技术，本文将介绍2024年6月发表在《Nature medicine》上的一篇基于AlloSeq cfDNA（careDX）产品的最新临床研究成果。

研究目的

评估ddcfDNA与肾移植排斥反应发生，进展和严重程度的关系，并明确ddcfDNA是否有助于监测肾移植排斥反应的参数模型。

研究方法

对14个来自欧洲和北美移植中心的2,882名肾移植受者，包括测试集1,134名患者和验证集1748名患者组成的队列进行肾活检和dd-cfDNA检测（AlloSeq cfDNA）。

2. dd-cfDNA的加入提高了监测模型的能力

研究显示，在测试集监测模型中加入dd-cfDNA后，模型的受试者工作曲线下面积（AUC，衡量模型辨别能力的指标）从0.777提升至0.821（P = 0.0011)，在验证集监测模型中AUC从0.743提升至0.842(P<2.2×10-16)，这意味着dd-cfDNA能够显著提高模型识别排斥反应的能力。

研究结果

1.dd-cfDNA水平与三种排斥反应有显著的关系

在1415例肾移植活检中，176（12.44%）个活检样本是抗体介导的排斥反应（AMR），34（2.4%）个活检样本是T细胞介导的排斥反应（TCMR），17（1.2%）个活检样本属于为混合型排斥反应。相比其他表现型，dd-cfDNA水平与这三种排斥反应显著相关，详细见Fig.1。

结论

器官移植被称为“现代医学之巅”，承载着终末期器官衰竭患者重获新生的最后希望。由于受体和移植物的人类白细胞抗原 HLA 的不同，会引发受体免疫系统对移植物的排斥反应，尤其是以目前检测手段无法早期监测的亚临床排斥反应，进而成为影响移植物长期存活的主要障碍。在传统的监测方法基础上，亟需新的、灵敏的标志物的出现。本文的研究证明了dd-cfDNA 的水平与肾同种异体移植物排斥反应的发生、进展和严重程度密切相关，同时dd-cfDNA结合其他指标模型能很好的提高对移植物排斥反应的监测能力，为dd-cfDNA在临床上的应用提供了有力的证据。

AlloSeq cfDNA是一款专门用于实体器官移植术后精准监测的产品，2020年获得了CE认证，通过202个SNP位点分析供者游离核酸在受者游离核酸中的占比，进而根据占比的多少预测患者术后的移植风险。

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